AFT總量(Aflatoxin Total)ELISA檢測試劑盒

產品名稱：AFT總量ELISA檢測試劑盒

產品概述：AFT是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產物，它們具有很強的致癌性，主要存在于谷物，堅果，棉籽以及一些和人類血液，動物飼料相關的產品中。農作物被收獲后有可能被下列的一種或幾種AFT污染：B1、B2、G1、G2。1993年AFT被世界衛生組織(WHO)的癌癥研究機構劃定為I類致癌物，是一種毒性*的劇毒物質。它被證明對人和動物的肝臟、腎臟等組織和器官具有很大的危害。產生AFT的霉菌（如黃曲霉、寄生曲霉等）遍及世界各地，AFT的污染可以發生在植物的生長、收獲和加工、貯藏、運輸等過程中。及時發現污染源是的預防AFT污染的方法。

  AFT總量ELISA檢測試劑盒本產品是利用免疫直接競爭法檢測原理建立的一種定量檢測試劑盒。具有簡單、快速，無需特殊儀器設備等優勢，既可以在實驗室進行，也可在農場、飼料混合車間等進行實地測定。本試劑盒結果準確，靈敏度度為0.1ppb，準確率大于95% 。適用于糧食、食品、飼料原料、配合飼料等樣本中的AFT總量的檢測。

適用范圍

可定性、定量檢測谷物、花生、食用油、飼料、啤酒、紅酒、醬油、面粉等樣本中的AFT總量。

試驗原理

  采用競爭ELISA，在微孔板上預包被AFT抗原，加入樣本（或AFT標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的AFT總量抗體。樣本或標準品溶液中的AFT與預包被在板孔上的AFT抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的AFT抗體，與樣本或標準品溶液中的AFT結合的酶標抗體在洗滌時被除去，再加入顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物AFT抗原的含量成負相關。對照標準曲線，即可得出相應殘留物AFT的含量。

試劑配制

（1）將取出放置于室溫中，使試劑盒回溫至室溫 (20-25℃)。

（2）10倍稀釋洗滌液準備：40mL濃縮洗滌液 (10×)，用蒸餾水或去離子水稀釋至 400mL。在2-8℃可保存三個月。用前混勻。

（3）10倍稀釋濃縮樣品稀釋液準備：20mL濃縮樣品稀釋液 (10×)，用蒸餾水或去離子水稀釋至 200mL。在2-8℃ 可保存三個月。用前混勻。

操作步驟

（一）谷物（樣品稀釋10倍）

1、脂肪含量少的谷物樣品（如大米、玉米、小米等）稱取1g（精細粉碎），加入4ml 50%甲醇/水溶液；

2、充分振蕩3min；

3、5000g離心，10min；

4、取400ul上清液，加600ul樣品稀釋液，充分混勻；

5、取50ul溶液用于檢測。

（二）花生（樣品稀釋10倍）

1、稱取1g樣品（精細粉碎），加入2ml石油醚，再加入4ml 50%甲醇/水溶液；

2、充分振蕩3min；

3、5000g離心，10min；

4、取400ul下層清液，加600ul樣品稀釋液充分混勻

5、取50ul溶液用于檢測。

（三）食用油（樣品稀釋10倍）

1、稱取1g樣品，加入4ml石油醚，充分振蕩；

2、再加4ml 50%甲醇/水溶液，輕搖3min，靜置分層；

3、取400ul下層清液，加600ul樣品稀釋液充分混勻；

4、取50ul溶液用于檢測。

（四）飼料（樣品稀釋5倍）

1、稱取1g飼料樣品（精細粉碎），加入4ml 50%甲醇/水溶液；

2、充分振蕩3min；

3、5000g離心，10min；

4、取上層清液2ml并加入2mlCHCL3，輕搖3 min，靜置分層；

5、取1ml下層液，60℃氮氣吹干；

6、加入500ul 50%甲醇/水（1:1）溶液溶解，并加入750ul樣品稀釋液，充分混勻；

7、取50ul溶液用于檢測。

（五）面粉（樣品稀釋10倍）

1、稱取1g面粉樣品，加入4ml 50%甲醇/水溶液；

2、充分振蕩3min；

3、5000g離心，10min；

4、取上層清液500ul并加入1mlCHCL3，輕搖3 min，靜置分層；

5、取500ul下層液（CHCl3層），60℃氮氣吹干；

6、加入250ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入375ul樣品稀釋液，充分混勻；

7、取50ul溶液用于檢測。

（六）葡萄酒（樣品稀釋5倍）

1、取1ml葡萄酒樣品，加入4mlCHCL3；

2、輕搖3 min，靜置分層；

3、取1ml下層液，60℃氮氣吹干；

4、加入500ul 50%甲醇/水溶液溶解，再加入750ul樣品稀釋液，充分混勻；

5、取50ul溶液用于檢測。

（七）啤酒（樣品稀釋10倍）

1、取1ml啤酒樣品（去除CO2），加入2.5ml甲醇，再加入1.5ml蒸餾水；

2、振蕩3min；

3、取出500ul振蕩后的溶液再加入750 ul樣品稀釋液，充分混勻；

4、取50ul溶液用于檢測。

（八）醬油、醋（樣品稀釋5倍）

1、稱取1g樣品，加入1ml蒸餾水和4mlCHCL3；

2、輕搖3min，靜置（若未分層，5000g離心10min）；

3、去1ml下層液，60℃氮氣吹干；

4、加入500ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入750ul樣品稀釋液，充分混勻；

5、取50ul溶液用于檢測。

注意事項

1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3、每加一種試劑前需將其搖勻。

4、反應終止液為2M鹽酸，避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6、儲存條件

保存于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的顯色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、試劑變質的跡象

顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（OD450nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

8、該*反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

試劑盒組成

1、96孔酶標板×1塊

2、標準液×6瓶：（1ml/瓶）

  0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb

3、酶標物 1瓶 …………………………………… 6ml

4、底物液1瓶  ………………………………… 12ml

5、終止液1瓶  ……………………………………6ml

6、濃縮洗滌液（10×）1瓶………………………40ml

7、濃縮樣品稀釋液（10×）1瓶…………………20ml

8、操作說明書一份                                            

注意：標準品含有低濃度AFT、終止液含2M HCl，需小心取用。勿在有效期外使用本試劑盒。

貯藏條件及保存期

貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。

保存期：該產品有效期為12個月。

如果您有技術上的問題也可以打電話咨詢我們，我們有自己獨立的精良的實驗室，屆時將竭誠為您服務。